Заморожений зоопарк. Введення в кріоархівірованіе

Заморожений зоопарк. Введення в кріоархівірованіе

Сергій Амстіславскій
"Наука з перших рук" №5 / 6 (53/54), 2013

Сьогодні майже п'ята частина з мешкають на планеті видів ссавців знаходиться під загрозою зникнення. Нові можливості для збереження генетичного біорізноманіття тваринного світу надають сучасні біотехнології, засновані на досягненнях репродуктивної біології. Йдеться про кріоконсервації (заморожування) гамет, ембріонів і ембріональних стовбурових клітин, що зберігаються в спеціальних кріобанку. Саме такий банк був недавно створений при новосибірському Інституті цитології і генетики СВ РАН.

Одна з найважливіших задач при створенні кріобанку – пошук оптимального способу розморожування і вилучення генетичної інформації. Сибірські дослідники запропонували використовувати в якості сурогатних матерів для заморожених ембріонів рідкісних і зникаючих видів їх міжвидові гібриди з близькородинними "домашніми" тваринами. Гіпотеза була успішно перевірена на зникаючий вигляді – європейської нірці, а також на мохноногих хом'яків.

про автора

Сергій Якович Амстіславскій – доктор біологічних наук, завідувач сектором кріоконсервації і репродуктивних технологій відділу генофондівекспериментальних тварин Інституту цитології і генетики СВ РАН (Новосибірськ). Автор і співавтор 90 наукових робіт.

Подібно до того як в знаменитій казці Р. Кіплінга людський дитинча, що не мав ні іклів, ні кігтів, врешті-решт знищив могутнього тигра Шер-Хана, в реальному світі людина, свідомо чи несвідомо, виявився причиною вимирання не тільки декількох підвидів тигра, а й багатьох інших видів диких тварин. Однак посів місце "царя звірів" людині слід взяти і відповідальність за збереження свого "царства". Сучасні біотехнології, засновані на досягненнях репродуктивної біології, надають нові, невідомі раніше можливості для збереження генетичного біорізноманіття тваринного світу і дають шанс на виживання тих видів, яким загрожує вимирання.

Зараз на планеті живе близько 5,0-5,5 тис. Видів ссавців, причому п'ята частина їх знаходиться під загрозою зникнення. Далеко не останню роль в цьому зіграло стрімке зростання чисельності людства, що досягла вже 7 млрд людей, і постійне розширення сфери його господарської діяльності.

Найбільш яскравим прикладом служить сімейство котячих, в якому з 37 відомих на сьогоднішній день видів цілком процвітає лише один – домашня кішка.Як правило, вимирають певні підвиди, а близькі до них – "стоять в черзі". Так, з восьми підвидів тигра збереглося всього п'ять. Зникли туранский (каспійський), яванський і балийский підвиди. Однак і положення існуючих п'яти підвидів можна назвати стабільним: за останніми оцінками, в дикій природі залишилося менше 3,5 тис. Особин тигра, хоча ще на початку ХХ ст. їх чисельність перевищувала 100 тис.

Яким же чином можна зупинити цей згубний процес? Традиційні методи, які полягають у створенні охоронюваних територій, далеко не завжди виявляються ефективними. Наприклад, того ж тигру для повноцінного життя в природі потрібні величезні простори: в Уссурійському краї мисливські угіддя тигра можуть досягати близько 900 км2, А в Маньчжурії – навіть 4 тис. Км2! Надати тваринам подібні умови в неволі надзвичайно складно, а часто взагалі неможливо.

Звичайно, тигрів можна утримувати і в зоопарках, на спеціальних тигрячих фермах, як це робиться, наприклад, в Південно-Східній Азії. Але подібні умови неминуче призводять до так званої "адаптації до неволі": тваринам, які виросли на фермі, потім вкрай складно повернутися в дику природу.Загальне правило таке: з кожним новим поколінням звірі, які виросли в неволі, все більше і більше одомашнюються і втрачають навички виживання в природному середовищі.

Прикладом цього може служити європейська норка, сьогодні є зникаючим видом на відміну від іншого представника куньіх – американської норки. В Естонії проводилися широкомасштабні експерименти по поверненню в дику природу європейських норок, народжених в умовах ферми. Однак ці спроби закінчилися невдачею: випущені на волю, тварини масово гинули. Крім того, деякі види тварин в неволі зазнають труднощів з розмноженням, прикладом чого можуть служити гепарди.

Так невже ж дикі види тварин приречені на поступове збіднення свого генофонду і, в кінцевому рахунку, на вимирання? Вихід з такої, здавалося б, безвихідної ситуації пропонує репродуктивна біологія – новий напрям, яке виросло на стику ембріології, генетики, зоології та ветеринарії.

Виявилося, що репродуктивні клітини, які є носіями безцінної генетичної інформації, можна піддати кріоконсервації (заморожування). З таких клітин – гамет, ембріонів і ембріональних стовбурових клітин, які зберігаються в кріобанку,можна згодом відновити той чи інший вид у всьому його генетичному різноманітті. Цей же підхід можна застосовувати і для створення банків генетичних ресурсів лабораторних тварин.

Все живе з яйця …

Початком репродуктивної біології можна вважати далекий 1702 року, коли знаменитий винахідник мікроскопа, нідерландський натураліст Антоні ван Левенгук відкрив феномен "воскресіння" дивовижних "звіряток", який він спостерігав при додаванні краплі води до пилу, зібраної з даху власного будинку. Дійсно, ці дрібні багатоклітинні організми, в яких вчені визнали один з видів коловерток – звичайних мешканців наших ставків, здатні тривалий час зберігатися у висушеному стані, не втрачаючи життєздатності, і "оживати" при створенні відповідних умов.

Спостереження Левенгука дали перші свідчення, що деякі живі істоти мають здатність перебувати в стані "латентної життя", т. Е. Своєрідною консервації. Залишилося лише знайти практичний і легковідтворюваною спосіб досягнення цього стану і виходу з нього – на його пошуки людство витратило наступні 250 років.

Пізнати таємниці репродуктивної біології, заглянути в дивовижну життя ембріонів і гамет сучасним дослідникам допомагають потужні мікроскопи, набагато досконаліші, ніж мікроскоп Левенгука. На світлині – співробітники сектора кріоконсервації і репродуктивних технологій ІЦіГ СО РАН к. Б. н. Т. О. Абрамова, к. Б. н. І. Н. Рожкова та аспірант О. Ю. Брусенцев близько мікроскопа DM2500 виробництва фірми Leica microsystems

Уже через вісімдесят років після відкриття Левенгука видатний італійський вчений Л. Спалланцани блискуче продемонстрував можливість штучного осіменіння собак. Це відкриття в числі інших призвело наукову громадськість до переконання, що в практичному відношенні найбільш підходящими для консервації об'єктами є репродуктивні клітини, наприклад, сперматозоїди, чоловічі гамети. Саме на них і зосередили свої зусилля перші кріобіології.

Серед них потрібно особливо відзначити видатного російського вченого І. І. Іванова, який на рубежі XIX-XX ст. не тільки успішно займався штучним заплідненням коней та інших тварин, а й зробив безліч вдалих спроб збереження насіння ссавців при низьких температурах.Після революції Іванов загорівся ідеєю схрестити людину з мавпою, для чого навіть здійснив поїздку в Африку і заснував в Сухумі розплідник мавп. Не виключено, що якби Іванов не розтратив весь свій талант і сили в марних спробах отримати "человекообезьяну", а залишився вірним дослідженням ефектів впливу холоду на сперматозоїди, він, можливо, зміг би відкрити криоконсервацию біологічних ресурсів в її сучасному вигляді.

Честь відкриття способу кріоконсервації чоловічого сім'я належить британським вченим К. Полджу і О. Сміт. І допоміг їм в цьому щасливий випадок. Після другої світової війни лабораторія, в якій працювали вчені, переживала не найкращі часи. Навіть у деяких банок з реактивами, які стояли в лабораторних шафах, не було етикеток, втрачених в результаті переїздів, бомбардувань та інших перипетій воєнного часу. Одну з таких банок і взяли Полдж і Сміт, проте замість потрібного речовини в ній виявився … гліцерин, який і був помилково використаний в експерименті.

Репродуктивна біологія сповнена парадоксів: сперматозоїд будинкової миші (праворуч на фотографії з помаранчевої рамкою) Представляється монстром в порівнянні зі сперматозоїдом домашньої кішки (зліва). При цьому вага кота становить кілька кілограм, а самця миші – всього кілька десятків грамів … Фото справа: на унікальній пам'ятці самому знаменитому лабораторному тварині, поставленому в 2013 р поруч з SPF-віварієм ІЦіГ СО РАН, бронзова лабораторна миша, подібно богині долі, в'яже подвійну "нитка" ДНК, основу генетичного коду життя. Автор і художник А. Харкевич. Скульптор А. Агріколянскій

Ось так були відкриті кріопротекторними властивості цього трехатомного спирту, а Полдж і Сміт зробили революцію в кріобіології, довівши, що під захистом гліцерину сперматозоїди можуть пережити охолодження до температури рідкого азоту (-196 ° С). Публікація цього відкриття в журналі Nature в 1949 р відкрила "еру штучного осіменіння" в тваринництві, і вже починаючи з 1950-х р в багатьох країнах насіння з кріобанку стали використовувати для розмноження великої рогатої худоби. Слід зазначити, що гліцерин і в наші дні залишається одним з кращих криопротекторов.

Але на цьому кріобіологи не зупинилися. Як відомо, при заплідненні, т. Е.злиття жіночих і чоловічих гамет, утворюється зигота (запліднена яйцеклітина), яка починає дробитися на дочірні клітини-бластомери. Така стадія розвитку зародка називається пре- або доімплантаційної. Перші успішні результати щодо заморожування Попередімплантаційна зародків ссавців (лабораторних мишей) були отримані на початку 1970-х рр. в Великобританії двома незалежними групами під керівництвом Д. Уіттінгема і Я. Уилмута. Через кілька років в лабораторії Уіттінгема успішно пройшли експерименти по заморожуванню ооцитів (жіночих гамет).

До теперішнього часу були успішно піддані заморожуванню і кріоконсервації Попередімплантаційна ембріони більш ніж сорока видів ссавців. Що ж стосується ооцитів, то до сих пір не існує ефективного методу заморожування більшості видів ссавців. Окремі успіхи в цій галузі поки не дають підстав вважати заморожування і криоконсервацию яйцеклітин настільки ж рутинної технологією, якою вона є по відношенню до ембріонам і насіння.

Банк генетичних ресурсів

концепція Genome Resource Banking здобула популярність в нашій країні під назвою "банк генетичних ресурсів" більш тридцяти років тому завдяки діяльності легендарного вченого-біофізика з Пущино Б. Н.Вепрінцева, його соратників і послідовників. Які ж види тварин представляють інтерес для кріоархівірованія? Перш за все це дикі тварини, для яких банки генетичних ресурсів є запорукою їх виживання, а також породи домашніх тварин, перш за все рідкісні і не затребувані в даний момент, але цінні в генетичному відношенні.

І, нарешті, лабораторні тварини. Стосовно до біомедичних досліджень концепцію "банк генетичних ресурсів" прийнято трактувати саме як банк ліній лабораторних тварин, що має на увазі консервацію не тільки "дикого типу" того чи іншого виду, але і його штучних, генетично закріплених форм.

В наші дні основним об'єктом експериментальних досліджень на хребетних є хатня миша. Не дивно, що саме геном миші, секвенований в 2002 р, став одним з перших розшифрованих геномів, поряд з геномом людини.

На цю тварину прекрасно "працюють" сучасні технології трансгенеза, спрямованого виключення (нокаути) окремих генів, мутагенезу. За прогнозами журналу Nature (2004), число мутантних, трансгенних і нокаутних ліній мишей, створених під конкретні наукові завдання,зростає настільки стрімко, що в найближчі десять років може досягти фантастичною цифри – 300 тисяч! Тому зміст багатьох з них в кріобанку у вигляді ембріонів або статевих гамет є не тільки реальною можливістю, а й необхідністю.

Вперше мишачі ембріони були піддані кріоконсервації ще в 1972 р, а сьогодні в світі існує дев'ятнадцять великих кріобанків, в яких зберігається генетичний матеріал різних ліній мишей.

Незамінним лабораторним тваринам залишається і щур, особливо в дослідженнях з моделювання захворювань людини, що мають полигенную (мультифакторна) основу, таких як артеріальна гіпертензія. Кріобанків, де зберігають генетичні ресурси щурів, в світі істотно менше – всього чотири (Agca et al., 2012).

Крім традиційних лабораторних тварин – мишей, щурів, кроликів і хом'яків, в експериментах нерідко задіють і інших ссавців, а також риб і птахів. Наприклад, знаменитий засновник етології (науки про поведінку тварин), нобелівський лауреат К. З. Лоренц зробив свої головні відкриття на птахах. Перспективними видами для кріоархівірованія є акваріумна рибка даніо реріо, а також собаки і кішки.Всі ці тварини є популярними об'єктами досліджень, орієнтованих на біомедичні мети (Амстіславскій, Трукшін, 2010 року; Agca, 2012).

Відомі кожному акваріумісти даніо реріо стали за останні десятиліття дуже знамениті, і не тільки через те, що в 1976 р вони побували в космосі. Після розшифровки їх генома виявилося, що він має досить багато спільних генів з людиною (Howe et al., 2013). Ці невеликі рибки добре розмножуються в неволі, невибагливі, вимагають мінімальних витрат на підтримку виду в культурі, а їх зародки прозорі, що істотно полегшує роботу дослідників.

На сьогоднішній день створено вже кілька тисяч ліній даніо реріо. Генетичні ресурси цієї рибки сьогодні зберігаються в двох кріобанку, в США і в Японії (Agca, 2012).

Домашня кішка представляє особливий інтерес для концепції Genome Resource Banking, Так як її дикі родичі, великі і малі представники сімейства котячих, знаходяться під загрозою зникнення. Домашня кішка допомагає підібрати репродуктивні технології для цих видів з урахуванням «котячої специфіки».

Що стосується домашньої кішки, то вона становить особливий інтерес для концепції "банк генетичних ресурсів" за цілою низкою причин.Це і разючу подібність її генома з геномом людини, і складну поведінку, і високі репродуктивні здібності, а також поява трансгенних моделей, наприклад, знаменитого кота на ім'я Mr. Green, в геном якого вбудований чужорідний новий ген (трансгени), який дозволяє цьому унікальному коту флуоресцировать в темряві під дією ультрафіолетового випромінювання загадковим зеленим світлом. Нещодавно це досягнення було блискуче підтверджено отриманням подібних кошенят (Amstislavsky et al., 2012). І, звичайно, домашня кішка є незамінною "моделлю" для відпрацювання та вдосконалення репродуктивних технологій стосовно до сімейства котячих, з огляду на, що практично всі її дикі родичі потребують збереження їх генетичних ресурсів.

Сьогодні в світі є, принаймні 22 кріобанку, в яких збирають і зберігають генетичний матеріал диких і зникаючих видів тварин. Такі центри часто працюють при великих зоопарках, музеях, наукових інститутах та інших організаціях, в завдання яких входить "колекціонування" генофондів диких тварин. Наприклад, в Німеччині такий центр знаходиться при Інституті зоології та дослідження диких тварин ім. Лейбніца (Берлін). Саме тут зберігають насіння, ооцити і зародки рідкісних видів сімейства котячих.

Так звані "допоміжні репродуктивні технології" бурхливо розвиваються, і за допомогою методів кріоконсервації, штучного осіменіння, репродуктивного клонування і трансплантації ембріонів можна успішно відтворювати живих особин при наявності в кріобанку кріоконсервованих гамет і (або) ембріонів (Амстіславскій, 2006; Амстіславскій, Трукшін 2010 ). На сьогоднішній день насіння більш ніж шістдесяти видів диких тварин було успішно заморожено і кріоконсервованих хоча б один раз. Такого ж успіху вдалося домогтися і в відношенні ембріонів більш ніж сорока різних видів ссавців, з яких більше половини – дикі тварини.

Сибірський Ноїв ковчег

Що не має аналогів в Російській Федерації криобанк був недавно створений в Інституті цитології і генетики СВ РАН (Новосибірськ). Поряд з роботами по збереженню генетичних ресурсів лабораторних тварин, в секторі кріоконсервації і репродуктивних технологій проводяться також дослідження, спрямовані на розробку підходів до збереження диких і зникаючих видів тварин за допомогою сучасних методів репродуктивної біології.Сьогодні в сибірському кріобанку зберігаються головним чином у вигляді заморожених ембріонів генетичні ресурси трьох десятків ліній мишей і щурів, деякі з яких більше ніде в світі не представлені. Загальна кількість ембріонів в кріобанку вже перевищило чотири тисячі.

Студентка-дипломниця кафедри фізіології НГУ Д. С. Рагаева проводить трансплантацію сурогатної матері ембріонів лабораторного пацюка в секторі кріоконсервації і репродуктивних технологій ІЦіГ СО РАН

Однак з приміщенням в криобанк ембріонів або насіння того чи іншого виду проблеми не закінчуються. Створення кріобанку – це не тільки пошук найменш травмуючого способу заморожування і кріохраненія матеріалу, але, що не менш важливо, способу розморожування і вилучення генетичної інформації.

Коли в кріобанку заморожені ембріони лабораторних мишей чи пацюків, "перетворення" замороженого матеріалу на живу істоту здійснюється досить просто: ембріони розморожують і трансплантують самкам того ж самого виду. Але як бути, якщо в криобанк вдалося зібрати гамети або зародки рідкісного, а тим більше зникаючого виду? Який сурогатній мамі ( "реципієнту") їх трансплантувати? Здавалося б, в цій якості можна використовувати близькоспоріднений вид "домашніх" тварин.Однак, як показує практика, ефективність міжвидової трансплантації зазвичай вкрай низька (Амстіславскій, 2011).

Зрештою до вирішення цієї проблеми вдалося знайти цікавий підхід. Згідно вихідної гіпотези, відмінними реципієнтами для ембріонів двох "батьківських" видів повинні стати їх міжвидові гібриди. Це припущення відразу ж вдалося перевірити на зникаючий вигляді – вищезгаданої європейської нірці. Цей вид, колись зустрічався з всі Європі, нині зберігся лише на кількох спеціалізованих фермах (Amstislavsky et al., 2008). Гібриди між європейською норкою і тхором – ще одним представником куньіх, досить легко отримують при спільному розведенні цих тварин (Тернівський, Тернівська, 1994).

В експерименті дванадцяти гібридним самкам-реципієнтам було трансплантоване в цілому 72 ембріона (головним чином європейської норки), в результаті чого народилося 36 дитинчат. Ефективність склала 50%, що вважається хорошим показником навіть при роботі з лабораторними тваринами, а для експериментів зі зникаючим видом і взагалі є великою удачею, рідко зустрічається у світовій практиці (Amstislavsky et al., 2006).А в одному експерименті, де самці були одночасно пересаджені ембріони і норки, і тхора, на світ з'явився змішаний виводок з хорчонка і норчат.

Ідеальними сурогатними матерями для рідкісних і зникаючих видів тварин є міжвидові гібриди, такі як ця самка хоноріка – гібрид тхора і європейської норки (вгорі). внизу – виводок "єдиноутробних" братів і сестер, отриманих в результаті імплантації ембріонів самці-реципієнту. Дитинчата є представниками різних видів ссавців

Однак наскільки універсальним є таке рішення? Адже те, що добре для куньіх, може виявитися неприйнятним для представників інших сімейств ссавців. Крім того, при роботі з тхорами і норками пересідали "свіжі" ембріони, що не піддавалися кріоконсервації. Але ж кінцева мета досліджень – знайти надійний спосіб отримувати повноцінних тварин з зберігаються в кріобанку ембріонів рідкісних і зникаючих видів.

Для подальших досліджень було обрано екзотичні хом'ячки роду Phodopus, Що означає "мохноногі". Цей рід складається з трьох видів, причому в лабораторних дослідженнях використовують два: джунгарских хом'ячків і хом'ячків Кемпбелла.Джунгарськие хом'ячки відомі своєю здатністю при різкому зниженні температури навколишнього середовища впадати в торпор (заціпеніння), стаючи нерухомими і майже млявими. Хом'ячки Кемпбелла знамениті своїм ставленням до потомству: мало можна знайти в природі видів ссавців, у яких батько відрізнявся б такий дбайливістю до свого потомства. Він навіть бере участь в пологах, а після народження дитинчат ніжно про них піклується.

У Сибірському кріобанку були вперше заморожені ембріони мохноногих хом'ячків, в тому числі хом'ячка Кемпбелла. Для оцінки життєздатності ембріонів мохноногих хом'ячків після кріоконсервації, ембріони були пофарбовані флуорохромами, в тому числі діацетат флуоресцеїну. Останній здатний забарвлювати тільки живі клітини, в яких він перетворюється на флуоресцеїн, що світиться під дією УФ-випромінювання зеленим світлом. Ті ембріони, які пройшли всі етапи заморожування і кріоконсервації, світилися рівним зеленим світлом (зліва). флуоресцентна мікроскопія Cправа – ті ж ембріони, але при використанні звичайної світлової мікроскопії. Ембріони виглядають непошкодженими

Важливо, що ці близькоспоріднені види здатні до гібридизації, т. Е.вони здатні схрещуватися (Feoktistova et al., 2013), хоча отримання таких гібридів і є непростим заняттям. У секторі кріоконсервації і репродуктивних технологій ІЦіГ СО РАН також навчилися заморожувати і культивувати ембріони мохноногих хом'ячків – вперше в світовій практиці. В результаті досить складних і трудомістких експериментів співробітники сектора переконалися, що заморожені ембріони залишаються життєздатними і згодом успішно розвиваються в сурогатних матерів.

Отже, шість ембріонів джунгарского хом'ячка, що пройшли через процедури заморожування, кріоконсервації при температурі рідкого азоту і розморожування були пересаджені гібридної самці-реципієнту, і в потрібний термін на світ з'явилося довгоочікуване потомство. Таким чином, була підтверджена гіпотеза, що міжвидові гібриди можуть бути хорошими реципієнтами для ембріонів батьківських видів.

На сьогоднішній день менш одного відсотка від 5-ти тис. Сучасних видів ссавців коли-небудь успішно піддавалися кріоконсервації на стадії Попередімплантаційна ембріона. І якщо для мишей, щурів і декількох видів сільськогосподарських тварин ця технологія набула масовості і застосовується буквально в промисловихмасштабах, то для диких, в тому числі зникаючих, рідкісних і екзотичних ссавців, успішні спроби кріоконсервації ембріонів і гамет вкрай нечисленні. Більш того, навіть у разі успіху ці спроби, як правило, навіть не намагалися повторити.

Ці мохноногі хом'ячки від моменту зачаття "прожили" фантастичну життя: на стадії ембріона, що складається всього з декількох клітин, вони тижнями "купалися" при температурі рідкого азоту в одному з криохранилище сектора кріоконсервації і репродуктивних технологій ІЦіГ СО РАН. Потім за допомогою водяної бані вони були "жваві". Так сучасні репродуктивні технології втілюють в життя стару казку про "живу" і "мертву" воду

У чому ж суть проблеми? Чому такий перспективний метод збереження біорізноманіття зникаючих видів так рідко застосовують для досягнення практичних цілей, заради яких цей метод і був створений?

Справа в тому, що біологія розмноження і раннього розвитку зникаючих видів, як правило, повна загадок і "білих плям", та й працювати з ними вкрай складно. Щоб "розкусити" цей "міцний горішок" необхідно застосувати всі сучасні знання і технології, які були отримані на мишах і інших типово "лабораторних" тварин.При цьому нечисленних представників зникаючих видів оберігають від усякого роду стресових впливів, до яких відноситься і дослідницька робота. Тому кожен новий успіх в кріоконсервації ембріонів і гамет на якомусь новому вигляді ссавців, в тому числі і на мохноногих хом'яків, є значущою подією на шляху втілення в життя концепції "банку генетичних ресурсів".

Потрібно додати, що оскільки при створенні кріобанку ембріонів і гамет диких, екзотичних або зникаючих видів тварин купуються нові знання по репродуктивної біології цих видів, саме ця наукова галузь і її різновид – ембріотехнологія, в співдружності з більш традиційними методами і підходами може реально допомогти в такому найважливішій справі, як збереження неповторної фауни планети Земля.

Робота виконана за підтримки РФФД (грант № 13-04-00685), а також проекту президії РАН № 30.1 програми "Біорізноманіття".

література
1. Амстіславскій С. Я. Репродуктивна біологія і ембріотехнологія ссавців. LAP LAMBERT Academic Publishing, Saarbrücken, Germany, 2011 року.
2. Амстіславскій С. Я., Трукшін І. С. Криобанк ембріонів ссавців: вибір пріоритетів і оптимальних репродуктивних технологій // Онтогенез. 2010. № 1. С.19-31.
3. Амстіславскій С. Я., Игонина Т. Н., Рожкова І. Н. та ін. Редерівація шляхом трансплантації ембріонів ліній лабораторних мишей і щурів // вавіловской журнал генетики та селекції. 2013. Т. 17. № 1. C. 202-217.


Like this post? Please share to your friends:
Залишити відповідь

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: